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15121072253
产品名称:

PEG3350溶液(50%,无菌)

 
产品编号: R18959 
供应商: 远慕生物 
储存方式: 4℃,6个月 
用途: 聚乙二醇诱导细胞融合,可用作融合剂,以获得生产单克隆抗体的杂交瘤细胞,诱导细胞杂交。也可用于酵母转化。 
PEG3350溶液(50%,无菌)
产品名称:PEG3350溶液(50%,无菌)
规格:100ml/500ml
供应商:上海远慕生物
分类:细胞培养
储存条件:室温,12个月
用途:聚乙二醇诱导细胞融合,可用作融合剂,以获得生产单克隆抗体的杂交瘤细胞,诱导细胞杂交。也可用于酵母转化。
注意事项:无菌溶液,由DPBS(pH7.4)和PEG33500或称聚乙二醇3350组成,经无菌处理。体外培养的单层贴壁细胞或悬浮细胞均可以做融合,但成功概率较大的是单层贴壁细胞。




酵母感受态细胞的制备:
1.活化菌种。-80℃保存的菌种在固体YPDA培养基(YPDA加20g Agar/L)上划线,在30℃培养2-4天。
2.挑取酵母单菌落在固体YPDA培养基上划3-5 mm的短线,在30 ℃培养2-4天。待酵母单菌落长至2 mm长时,接种。
3.首先把酵母细胞接种到3 ml液体YPDA培养基中,30℃过夜培养。
4.第二天转接到含有30 ml液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养,待OD600到0.4-0.5范围内。收集细胞,1000 g,离心5 min, 去上清。
5.沉淀用30-50 ml的无菌的去离子水悬浮。1000 g,离心5 min,去上清。
6.沉淀用合适体积的100 mM LiAc悬浮(30 ml的酵母菌最多用不超过1 ml的100 mM LiAc悬浮,通常100 μl的酵母细胞用于转化一个质粒,即一个反应)。
7.把酵母细胞的悬浮液分装到1.5 ml的离心管中,每管分装100 μl,用于转化一个质粒即一个反应。1000 g,离心5 min,去上清。制备好的感受态细胞备用。

酵母转化:
1.配制预混液,每转化一个质粒即一个反应需要360 μl的预混液。

50% PEG

240 μl

1 M LiAc

36 μl

Carrier DNA(10 mg/ml)

5 μl

质粒(大约200 ng/μl)

5 μl(根据质粒的浓度加入相应的体积)

总体积

360 μl


2.吸取360 μl的预混液加入到感受态细胞中,用枪头反复吹吸沉淀,使离心管底的酵母细胞彻底地悬浮在含有PEG的预混液中。
3.放置在30 ℃的水浴锅中孵育30 min,每10 min混匀一次。
4.放置在42 ℃的水浴锅中热击30 min,每10 min混匀一次。
5.12000 rpm,离心1 min,去掉上清液。
6.沉淀中加入100 μl的无菌的去离子水,悬浮沉淀。
7.把酵母细胞涂到相应的酵母培养基平板上,30℃培养2-4天。


注意事项:
1. 初次使用Carrier DNA,请把装有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min,然后立即放在冰上,用后放在-20℃储存备用。下次使用时请在冰上解冻Carrier DNA。
2. PEG溶液在低温环境下会析出,请于常温环境下完全溶解后使用。
3. 转化全程要无菌操作。


注意事项
1.避免接触眼睛、呼吸系统、皮肤;若误接触眼睛,立即用水冲洗或向医生咨询;
2.由于组织或细胞性质不同,实验人员应依据具体情况,确定**消化时间;消化细胞时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁和生长状况;
3.本产品不含抑菌剂,在使用过程中要特别注意无菌操作,避免消化液被微生物污染,大包装,建议无菌分装保存;
4.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。



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