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远慕生物简述几种TBS缓冲液配制方法

2019-09-27 14:43 作者:洛辰 来源:上海远慕生物试剂

       TBS缓冲液是Tris-HCl缓冲盐溶液,为等渗盐溶液加Tris-HCl缓冲液。属于常规pH缓冲液,常用于清洗免疫染色的组织或Western?Blot?中的蛋白印迹膜等,是常用分子生物学试剂。TBS缓冲液(0.05mol/L,pH7.4)主要由Tris、氯化钠、BSA、防腐剂等组成,可用于免疫金银染色中清洗组织,亦可作为封闭液的基础试剂。
Tris缓冲盐水(TBS):10mmol/L,Tris含0.9%NaCl,用1N HC1调pH至7.4;
操作步骤(仅供参考):
1、石蜡切片脱蜡至水。
2、胰蛋白酶消或3M尿素消化。
3、蒸馏水冲洗2次。
4、TBS缓冲液(0.05mol/L,pH7.4)振荡洗涤2次,每次5~10min。
5、进行封闭及下游其他实验。
一、TBS的配制
0.05 M TBS ( pH7.4 ) 的配制:
Tris (三羟甲基胺基甲烷 )12.1g
NaCl17.5g
加蒸馏水1500ml
磁性搅拌下滴加浓HCl至pH为7.4,再加蒸馏水至2000ml,即可。
如需含1% Triton X-100,则在滴加HCl前先加入20ml Triton X-100。
二、THB的配制
A液 ( 0.2 M Tris ):( MW 121.14 ) 称取2.428克 Tris,溶于100毫升蒸馏水中。
B液 ( 0.1 N HCl): 取37% HCl ( 比重1:19 ) 0.84毫升,加入蒸馏水中,使成100毫升。
不同pH ( 7.19 ~ 9.10 ) 的0.05 M THB配制:按下表,取A液25ml加B液Xml,补加蒸馏水至100ml。
B=X     pH     B=X     pH
45.0   7.19   25.0   8.14
42.5   7.36   22.5   8.23
41.4   7.40   20.0   8.32
40.0   7.54   17.5   8.41
38.4   7.60   15.0   8.51
37.5   7.66   12.5   8.62
35.0   7.77   10.0   8.74
32.5   7.87   7.5    8.92
30.0   7.96   5.0    9.10

27.5   8.05

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