pK19mobSacB-T7 polymerase原核载体

产品名称：pK19mobSacB-T7polymerase原核载体
规格：0.5-2ug质粒干粉
货号：YM2637

基本信息：
别名:T7polymerase
原核抗性:卡那霉素Kan
筛选标记:自杀基因SacB
克隆菌株:大肠杆菌DH5α
培养条件:LB培养基/37℃

质粒图谱



扩增流程：
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（请务必转化挑单克隆重提后使用）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒；
②取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入500μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
④取10μl、100μl复苏液，并分别涂布至目标质粒抗性的LB平板上；
（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37度培养16h。如果要求是30度则培养20h；
（如果菌落过多，请将质粒稀释后再转化。如果无菌落，请加入10μl质粒离心全涂转化）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

2、甘油菌：四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌：穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、平板：直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒：单独提取的液体质粒收到后可直接使用。