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溶菌酶的溶菌作用机制

2022-09-22 13:24 来源:上海远慕生物试剂
溶菌酶(lysozyme)又称胞壁质酶(muramidase)是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键,使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽,导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合,与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐,使病毒失活。因此,该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。
[基本原理]
溶菌酶的杀菌机理是其作用于细菌细胞壁的粘肽层,粘肽是细菌的细胞壁主要成分。溶菌酶能切断粘肽结构中的 N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸之间的β- 1,4糖苷键,破坏粘肽支架,使细胞壁破坏。由于细菌细胞壁的重要功能之一是保护细菌,即抗低渗,故细菌失去细胞壁的保护作用后,在低渗环境中可发生溶解。溶菌酶的主要作用对象是革兰氏阳性菌。革兰氏阴性细菌细胞壁粘肽层外还有脂多糖、外膜和脂蛋白结构,故在一般情况下溶菌酶不易发挥直接做用。

[实验材料]
溶壁微球菌( M.Lysodeikticus):本菌是由空气中分离出的一种革兰氏阳性菌,对人不致病,菌落黄色,普通琼脂培养基生长良好,每月传代一次或冻干保存,用于制备溶壁微球菌琼脂平板。
标准溶菌酶:称取溶菌酶标准纯品,用 1/15mol.L -1 PBS配制为1000ug/ml原液,并稀释为100、50、10 ug/ml标准液,用前保存在冰箱中;用于阳性对照及制备标准曲线。
唾液:用无菌平皿收集唾液,可在同学间收集。
其它:无菌打孔器(孔径 2mm),无菌毛细吸管、米尺等。

[实验方法]
用无菌打孔器在溶壁微球菌琼脂平板上打孔,用针头挑出孔内琼脂,孔径 2mm左右,孔距5-20mm。
用毛细吸管取新鲜收集的唾液加入琼脂孔内,每孔加一滴,每滴约有 0.025ml,同时加标准溶菌酶作阳性对照。
置 24-28 C°下12-18h观察结果。

[实验结果]
用小米尺或三角板量取小孔周围溶菌环直径,并作记录,可与标准溶菌酶阳性对照作对比观察。
如需定量测定检品(唾液)中的溶菌酶含量,可将上述各种稀释度的溶菌酶标准溶液,分别加入小孔中,同法测定溶菌环直径,用半对数纸制成标准曲线,检品中的溶菌酶含量可从标准曲线上查出。
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