液体培养基中细菌培养实验

　　仪器、耗材 玻璃瓶烧瓶

　　实验步骤

　　一、过夜培养

　　1.  将5 ml预热的液体培养基移入一无菌的16 mm或18 mm管中。

　　2.  用接种环挑一个单菌落，浸没于培养液中并轻轻振动接种环，使待接种的细菌分散在培养液中。

　　3.  盖好试管，在摇床或转鼓式培养装置上以60 r/min速度，于37°C培养至饱和（1X109~ 2X109 细胞 /ml，>6 h）。

　　二、大体积培养

　　1.  在一无菌的Erlenmeyer或baffle瓶中，用新鲜预热的培养液按I1: 100的比例稀释过夜培养物，烧瓶的体积应该是培养液体积的5倍以上。如果不摇动培养，所用烧瓶的体积应比培养液体积大20倍以上，以确保足够的通气。

　　2.  37°C，剧烈摇动培养（约300 r/min)。

　　三、利用计数板监测生长情况

　　1.  用一片干净的盖玻片盖住一片干净的计数玻片（或者血球计)。

　　2.  小心地将一小滴培养液滴到盖玻片的边缘，这样培养液可扩散人盖玻片下。

　　3.  在相差显微镜400倍下观察，并且按一个小方块中所见的每个细菌大约相当于2X107 细胞/ml计算细菌浓度。

　　四、利用分光光度计监测生长情况

　　因为仪器的差异性，分光光度计应该用一已知浓度的培养液进行校准。

　　1.  测OD600。为了获得一个准确的读数，稀释培养液至OD600＜1。

　　2.  按每0. 1 OD值大约相当于108 细胞/ml计算细菌浓度。