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液体培养基中细菌培养实验

2022-05-12 11:42 作者:安桐 来源:上海远慕生物试剂
  仪器、耗材 玻璃瓶烧瓶

  实验步骤

  一、过夜培养

  1.  将5 ml预热的液体培养基移入一无菌的16 mm或18 mm管中。

  2.  用接种环挑一个单菌落,浸没于培养液中并轻轻振动接种环,使待接种的细菌分散在培养液中。

  3.  盖好试管,在摇床或转鼓式培养装置上以60 r/min速度,于37°C培养至饱和(1X109~ 2X109 细胞 /ml,>6 h)。

  二、大体积培养

  1.  在一无菌的Erlenmeyer或baffle瓶中,用新鲜预热的培养液按I1: 100的比例稀释过夜培养物,烧瓶的体积应该是培养液体积的5倍以上。如果不摇动培养,所用烧瓶的体积应比培养液体积大20倍以上,以确保足够的通气。

  2.  37°C,剧烈摇动培养(约300 r/min)。

  三、利用计数板监测生长情况

  1.  用一片干净的盖玻片盖住一片干净的计数玻片(或者血球计)。

  2.  小心地将一小滴培养液滴到盖玻片的边缘,这样培养液可扩散人盖玻片下。

  3.  在相差显微镜400倍下观察,并且按一个小方块中所见的每个细菌大约相当于2X107 细胞/ml计算细菌浓度。

  四、利用分光光度计监测生长情况

  因为仪器的差异性,分光光度计应该用一已知浓度的培养液进行校准。

  1.  测OD600。为了获得一个准确的读数,稀释培养液至OD600<1。

  2.  按每0. 1 OD值大约相当于108 细胞/ml计算细菌浓度。
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