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实验室环境和人体表面微生物的检查

2021-11-15 10:49 作者:洛辰 来源:上海远慕生物试剂
一、目的要求
1.证明实验室环境与体表存在微生物。
2.比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型。
3.体会无菌操作的重要性。

二、基本原理
平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分,当取自不同来源的样品接种于培养基上,在37℃温度下培养,1-2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖,形成一个可见的细胞群体的集落,称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点,例如菌落的大小,表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑,边缘整齐或不整齐,菌落透明或半透明或不透明,颜色以及质地疏松或紧密等。因此,可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。

三、器材
肉膏蛋白胨琼脂平板,无菌水,灭菌棉签(装在试管内),接种环,试管架,酒精灯或煤气灯,记号笔(或蜡笔),废物缸。

四、操作步骤
每组在“实验室”和“人体”两大部分中各选择一个内容做实验,或由教师指定分配,最后结果供全班讨论。

1.写标签
任何一个实验,在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号,培养皿的记号一般写在皿底上。如果写在皿盖上,同时观察两个以上培养皿的结果,打开皿盖时,容易混淆。用记号笔写上班级、姓名、日期,本次实验还要写上样品来源(如实验室空气或无菌室空气或头发等),字尽量小些,写在皿底的一边,不要写在当中,以免影响观察结果。

2.实验室细菌检查
(1)空气 将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在当时做实验的实验室,移去皿盖,使琼脂培养基表面暴露在空气中;将另一肉膏蛋白胨琼脂平板放在无菌室或无人走动的其他实验室,移去皿盖。一小时后盖上两个皿盖。
(2)实验台和门的旋钮
(a)用记号笔在皿底外面中央画一直线,再在此线中间处画一垂直线。
(b)取棉签 左手拿含有棉签的试管,在火焰旁用右手的手掌边缘和小指、无名指夹持棉塞(或试管帽),将其取出,将管口很快地通过煤气灯(或酒精灯)的火焰,烧灼管口;轻轻地倾斜试管,用右手的拇指和食指将棉签小心地取出。放回棉塞(或试管帽),并将空试管放在试管架上。
(c)弄湿棉签 左手取灭菌水试管,如上法拔出棉塞(或试管帽)并烧灼管口,将棉签插入水中,再提出水面,在管壁上挤压一下以除去过多的水分,小心将棉签取出,烧灼管口,放回棉塞(或试管帽),并将灭菌水试管放在试管架上。
(d)取样 将湿棉签在实验台面或门旋钮上擦拭约2平方厘米的范围。
(e)接种 A在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿开启成一缝。再将棉签伸入,在琼脂表面顶端接种(滚动一下),立即闭合皿盖。E和F,将原放棉签的空试管拔出棉塞(或试管帽),烧灼管口,插入用过的棉签,将试管放回试管架。
(f)划线 另取接种环在火焰上灭菌,先将环端烧热,然后将接种环提起垂直放在火焰上,以使火焰接触金属丝的范围广一些,待接种环烧红,再将接种环斜放,沿环向上,烧至可能碰到培养皿的部分,再移向环端,如此很快地来回通过火焰数次。
左手拿起平板,同样开启一缝,将灭过菌并冷却了的接种环(可在琼脂表面边缘空白处试温度,若发出溅泼声,表示太烫),通过琼脂顶端的接种区,向下划线,直到平板的一半处。注意:接种环与琼脂表面的角度要小,移动的压力不能太大,否则会刺破琼脂。
闭合皿盖,左手将平板向左转动至空白处,右手拿的接种环再在火焰上烧灼,使冷。接种环通过前面划的线条再在琼脂的另一半,D上向下来回划线至1/2处。
烧灼接种环,转动平板,E,划最后1/4,立刻盖上皿盖,烧灼接种环,放回原处。
整个划线操作均要求无菌操作,即靠近火焰,而且动作要快。

3.人体细菌的检查
(1)手指(洗手前与洗手后)
(a)分别在两个琼脂平板上标明洗手前与洗手后(当然,班级、姓名、日期各项在每次写标签时是必不可少的)。
(b)移去皿盖,将未洗过的手指在琼脂平板的表面,轻轻地来回划线,盖上皿盖。
(c)用肥皂和刷子,用力刷手,在流水中冲洗干净,干燥后,在另一琼脂平板表面来回移动,盖上皿盖。
(2)头发 在揭开皿盖的琼脂平板的上方,用手将头发用力摇动数次,使细菌降落到琼脂平板表面,然后盖上皿盖。
(3)咳嗽 将去盖琼脂平板放在离口约6-8cm处,对着琼脂表面用力咳嗽,然后盖上皿盖。
(4)鼻腔
(a)按照实验台检查法的步骤(b)和(c),取出棉签,并将其弄湿。
(b)用湿棉签在鼻腔内滚动数次。
(c)按实验台检查法的步骤(e)和(f),接种与划线,然后盖上皿盖。
4.将所有的琼脂平板翻转,使皿底在上,放37℃培养箱,培养1-2天。

5.结果记录方法
(1)菌落计数在划线的平板上,如果菌落很多而重叠,则数平板最后1/4面积内的菌落数。不是划线的平板,也一分为四,数1/4面积的菌落数。
(2)根据菌落大小、形状、高度、干湿等特征观察不同的菌落类型。但要注意,如果细菌数量太多,会使很多菌落生长在一起,或者限制了菌落生长而变得很小,因而外观不典型,故观察菌落的特点时,要选择分离得很开的单个菌落。

菌落特征描写方法如下:
(a)大小 大、中、小、针尖状。可先将整个平板上的菌落粗略观察一下,再决定大、中、小的标准,或由教师指出一个大小范围。
(b)颜色 黄色、金黄色、灰色、乳白色、红色、粉红色等。
(c)干湿情况 干燥、湿润、粘稠。
(d)形态 圆形、不规则等。
(e)高度扁平、隆起、凹下。
(f)透明程度 透明、半透明、不透明。
(g)边缘 整齐、不整齐。
 
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