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油红O异丙醇饱和液使用方法

2021-09-15 15:20 来源:上海远慕生物试剂
产品名称: 油红O异丙醇饱和液
规格:100ml
用途:脂肪/脂滴染色
注意事项:主要由油红O、异丙醇组成,染色后脂滴呈橘红色。
储存条件:室温,24个月

简介:脂质(Lipid)是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称,其共同的物理特性是不溶于水,易溶于有机溶剂(如乙醇、乙醚等)。人体的脂肪主要有两种:1、储存脂肪,如中性脂肪,主要分布于皮下、肾、胰腺等部位。2、结构脂肪,如类脂(磷脂、糖脂、胆固醇等),主要分布于细胞内。中性脂肪(Neutralfat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油组成的脂类,呈中性。中性脂肪是储存能量的方式之一,在氧化时释放出能量。在正常情况下,除脂肪细胞外,其他细胞在光学显微镜下几乎看不到脂滴,如果细胞质内出现大量脂滴即为脂肪变性,常见于肝细胞、心肌细胞、肾曲管上皮细胞等。中性脂肪染色经常采用苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑B、油红O法等。传统方法采用苏丹染料,最近发现偶氮染料油红O更适合脂肪的染色。油红O是很强的脂溶剂和染脂剂,较易与甘油三脂结合呈小脂滴状,与磷脂结合力稍差。其染色原理一般认为是物理上的溶液作用或吸附作用,借溶液作用使脂肪染色。染料在冰冻切片内脂质的溶解度较原溶剂中的溶解度更大,所以在染色时染料就从有机溶剂转移入脂质而使脂肪染色。

油红O染色主要用于显示组织器官的脂肪变性和类脂质的异常沉着,常发生于肝、肾、心等实质脏器的脂肪变性,细胞内出现多数中性脂肪滴;鉴别和诊断脂肪组织中所发生的肿瘤及其性质。标本不采用含有乙醇的固定液(如需要固定可采用10%福尔马林)、也不采用石蜡切片,需用冰冻切片或碳蜡切片。脂肪的阳性染色结果呈橘黄至红色,但具体颜色因脂质浓度而定。

自备材料:
1、60%异丙醇
2、蒸馏水
3、Mayer苏木素染色液
4、1%盐酸溶液
5、甘油明胶或阿拉伯糖胶

操作步骤(仅供参考):
1、油红O异丙醇饱和溶液:蒸馏水按一定比例配制油红O染色工作液。
2、冰冻切片,不固定或福尔马林固定后水洗。
3、切片入蒸馏水中稍冲洗。
4、切片入异丙醇浸洗。
5、切片入油红O染色工作液(加盖),密闭染色。
6、分色:入60%异丙醇内稍洗以便去除染液。
7、入蒸馏水中稍微清洗。
8、入Mayer苏木素染色液,复染核。
9、(可选)1%盐酸溶液稍微分化一下。
10、(可选)自来水漂洗10min或稀碳酸锂溶液促蓝。
11、入蒸馏水稍微清洗。
12、用滤纸吸干周围水分。
13、甘油明胶或阿拉伯糖胶封固。

注意事项:
1、油红O染色工作液不够稳定,易产生沉淀,不宜提前配制。
2、如果60%异丙醇不易获得,亦可采用70%乙醇。
3、由于脂肪易溶于有机溶剂,显示脂肪一般不能像石蜡切片一样处理,而通过冰冻切片染色来显示。
4、作为脂肪染色的冰冻切片不可太薄,过薄的切片常会使脂质丢失。
5、Mayer苏木素染色液复染时间不能过长。
6、染色结果不能长期保存,应尽快观察及照相。
7、甘油明胶封固的样本,保存时间不长。如需长期保存,可以在盖玻片与载玻片交界的边缘用中性树胶封闭。
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