Ehrlich苏木素染色液操作步骤

中文名称：Ehrlich苏木素染色液
规格：100ml|500ml
用途：属于常规切片HE染色的明矾苏木素的一种,尤其适用于教学和科研上的核染色质染色,也可用于黏蛋白染色(如软骨的黏多糖),推荐用于骨和软骨的染色。
注意事项：经酸处理过的切片染色以及核的染色、骨和软骨的染色中leagene推荐采用该试剂。冷冻切片染色效果不佳,成熟时间2个月,染色时间一般15-20分钟。
储存条件：室温，24个月

简介：苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色简称HE染色，是病理学和组织学最常用的一种染色方法。苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的主要成分是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素成熟的方法有自然氧化法、化学氧化法。自然氧化是指暴露于光和空气中，这个过程比较缓慢，约需3~6个月不等，但生成物染色能力可维持很长时间。EhrlichE和Delafield苏木素就属于这种。Ehrlich苏木素作为一种良好的核染色液，也可用于黏蛋白染色如软骨的黏液多糖，骨和软骨的染色也推荐使用Ehrlich苏木素染液。

Jimei Ehrlich苏木素染液非常稳定，成熟后密封可保存2年。对核染色质染得很清晰细致，染色时间也稍长，约15~20min。适用于教学和科研上的制片染色，用此染色液对冷冻切片染色则不理想。


染色原理：
1、细胞核染色的原理：苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
2、细胞浆染色的原理：伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色。细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与染液的pH值密切相关。当染色液pH值在胞浆蛋白质等电点（4.7~5.0）以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。
3、分化作用：染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE染色中常用1%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织与色素分离而退色。大多数组织经苏木素染色后，必须用1%盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去，再进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。
4、返蓝作用：分化之后，苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色；在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色，立即用水除去组织切片上的酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。另外用自来不浸洗也可使细胞核返蓝，但所需时间较长。

自备材料：
1、酸性乙醇分化液
2、蓝化液，如稀氨水、碳酸锂溶液等
3、系列乙醇
4、伊红染色液
5、4%多聚甲醛


操作步骤（仅供参考）
（一）石蜡切片染色
1、切片脱蜡至水①二甲苯作用2次，每次5~10min。
②（可选）无水乙醇作用2次，每次3~5min。
③95%的乙醇3~5min。
④90%的乙醇3~5min。
⑤80%的乙醇3~5min。
⑥自来水或蒸馏水冲洗1~3min。

2、染色
①Ehrlich苏木素染色液染色15~20min。
②自来水或蒸馏水冲洗5~10s。
③（可选）盐酸乙醇分化2~5s。
④自来水冲洗20~30s。
⑤（可选）蓝化液返蓝20~40s。
⑥自来水冲洗30~60s。
⑦伊红染色液染色3~5min。
⑧自来水冲洗1~5s。

3、脱水、透明、封固
①80%乙醇10~20s。
②90%乙醇10~20s。
③95%乙醇作用2次，每次1~2min。
④无水乙醇作用2次，每次2~3min。
⑤二甲苯透明3次，每次2~3min。
⑥中性树脂封片。
染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、肌纤维、胶原纤维等呈深浅不一的红色；角蛋白、红细胞等呈明亮的橙红色。

（二）细胞染色
1、４%多聚甲醛固定10~20min。
2、自来水冲洗２次，每次２min。
3、蒸馏水冲洗２次，每次２min。
4、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤，作用时间应相应缩短。
染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、纤维呈红色。


注意事项：
1、切片脱蜡应尽量干净。系列乙醇应经常更换新液。
2、盐酸乙醇分化时间应根据切片厚薄、组织类别以及新旧而定，另外分化后自来水冲洗时间应该足够，以便彻底清洗酸。
3、蓝化液常使用0.2~1%氨水或Scott促蓝液或0.1~1%碳酸埋溶液。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。