改良Lillie-Mayer苏木素染色液使用方法

中文名称：改良Lillie-Mayer苏木素染色液    
规格：100ml|500ml
用途：常规组织切片HE染色
注意事项：苏木素染色中leagene推荐采用该试剂。无氧化膜，细胞核染色质着色深而细微，临床上常替代Harris苏木素染色液，染色时间一般3-5分钟。
储存条件：室温，2个月

简介：苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色简称HE染色，是病理学和组织学最常用的一种染色方法。苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的主要成分是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易不带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。

改良Lillie-Mayer苏木素染色液无毒，无氧化膜，细胞核染色质着色深而细微，临床上常替代Harris苏木素染色液。对细胞核染色很清晰，不着染胞质和纤维成分，属进行性染色，故染色后可以不用盐酸乙醇分化，染色时间约5～8min，如果是充分氧化后可染色3～5min。常用于糖原等特染、酶组化和免疫组化等染色后复染细胞核作对照染色，尤其适用于经过特殊染色后不能经酸处理时对细胞核的复染。在特殊染色中，常不天青石蓝B液联合染色，使细胞核染色后不被后续的酸性染料所褪色。

染色原理：
1、细胞核染色的原理：苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易不带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
2、细胞浆染色的原理：伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色。细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色不染液的pH值密切相关。当染色液pH值在胞浆蛋白质等电点(4.7～5.0)以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，不胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。
3、分化作用：染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE染色中常用1%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织不色素分离而退色。大多数组织经苏木素染色后，必须用1%盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去，再进行伊红染色，才能保证细胞核不细胞浆染色的分明。
4、返蓝作用：分化之后，苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色；在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色，立即用水除去组织切片上的酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。另外用自来水浸洗也可使细胞核返蓝，但所需时间较长。

使用方法：
(一)石蜡切片染色
1、切片脱蜡至水
①二甲苯作用2次，每次5～10min。
②(可选)无水乙醇作用2次，每次3～5min。
③95%的乙醇3～5min
④90%的乙醇3～5min
⑤80%的乙醇3～5min
⑥自来水或蒸馏水冲洗1～3min
2、染色
①改良Lillie-Mayer苏木素染色液染色5～8min
②自来水或蒸馏水冲洗5～10s
③(可选)盐酸乙醇分化2～5s
④自来水冲洗20～30s
⑤(可选)蓝化液返蓝20～40s
⑥自来水冲洗30～60s
⑦伊红染色液染色3～5min
⑧自来水冲洗1～5s

3、脱水、透明、封固
①80%乙醇10～20s
②90%乙醇10～20s
③95%乙醇作用2次，每次1～2min。
④无水乙醇作用2次，每次2～3min。
⑤二甲苯透明3次，每次2～3min。
⑥中性树脂封片。
染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、肌纤维、胶原纤维等呈深浅丌一的红色；角蛋白、红细胞等呈明亮的橙红色。


(二)冰冻切片染色
1、乙mi-乙醇混合固定液5～10s
2、自来水冲洗2～5s
3、改良Lillie-Mayer苏木素染色液滴染1～2min(可加热至50℃)。
4、自来水冲洗2～5s
5、(可选)盐酸乙醇分化2～5s
6、自来水冲洗2～5s
7、(可选)蓝化液返蓝2～5s
8、自来水冲洗5～10s
9、伊红染色液染色2～5s
10、自来水冲洗1～2s
11、80%的乙醇1～2s
12、95%的乙醇1～2s
13、无水乙醇2～5s
14、苯酚二甲苯(1:3)2～5s
15、二甲苯透明3次，每次2～5s。
16、中性树脂封片
染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、纤维呈红色。

(三)细胞染色
1、4%多聚甲醛固定10～20min。
2、自来水冲洗2次，每次2min。
3、蒸馏水冲洗2次，每次2min。
4、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤，作用时间应相应缩短。
染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、纤维呈红色。


【注意事项】
1、切片脱蜡应尽量干净。
2、系列乙醇应经常更换新液。
3、盐酸乙醇分化时间应根据切片厚薄、组织类别以及新旧而定，另外分化后自来水冲洗时间应该足够，以便彻底清洗酸。
4、乙ni-乙醇混合固定液是由乙醚和95%乙醇等量混合而得，再加入适量乙酸，密闭保存。
5、冷冻切片染色时间尽量要短。
6、蓝化液常使用0.2～1%氨水或Scott促蓝液或0.1～1%碳酸锂溶液。
7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。