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影响酶促反应的因素--温度、PH和抑制剂

2018-11-27 10:08 作者:洛辰 来源:上海远慕生物试剂
酶作为生物催化剂与一般催化剂一样呈现温度效应。酶促反应开始时,反应速度随温度升高增快。达到zui大反应速度时的温度称为某种酶的zui适温度。由于绝大多数酶是又活性的蛋白质,当达到zui适温度后,继续升高温度,引起蛋白质变性,酶促反应速度反而逐步下降,以致完全停止。

酶的zui适温度不是一个常数,与作用时间长短有关。测定酶活性均在酶促反应zui适温度下进行。大多数动物来源的酶zui适温度为37-40℃,植物来源的酶zui适温度为50-60℃。

酶的催化活性与环境PH有密切关系,通常各种酶只在一定PH范围内具有活性,酶活性zui高时的PH,称为酶的zui适PH。高于或低于此PH时酶的活性逐渐降低。

酶的zui适PH不是一个特征物理常数,对于同一个酶,其zui适PH因缓冲液和底物的性质不同而又差异。

在酶促反应过程中,抑制对酶的抑制作用可分为可逆抑制和不可逆抑制。可逆抑制有根据抑制剂和底物的关系分为三种类型;竞争性抑制,非竞争性抑制和反竞争性抑制。

实例如下:

一、试剂

5%三氯醋酸溶液。1mmol/L苯甲脒;称取19.25g苯甲脒,用少量水溶解,定容至100ml。

1%酪蛋白溶液;取1g酪蛋白,加0.1mol/L氢氧化钠溶液10ml、水40ml,置60℃水浴加入至溶解,放置室温后,加水稀释成100ml,并调至PH8.0.

0.1mol/L硼酸缓冲液;

A液,0.1mol/L硼酸(H2BO3);称取6.18gH3BO3溶于1000mL水中。

B液,0.025mol/L硼砂(Na2B4O7·10H2O);

称取9.54g硼砂(Na2B4O7·10H2O)溶液1000ml水中。

PH7.4硼酸缓冲液;90ml A液+10ml B液

PH8.0硼酸缓冲液;70ml A液+30ml B液

PH9.0硼酸缓冲液;20ml A液+80ml B液、

材料

酪蛋白酶溶液:50-200ug/ml,用0.1mol/L,PH8.0硼酸缓冲液配制。可用粗提的猪胰蛋白酶,用量根据实际测得比活值而定。

仪器:

试管1.5cm x15cm(x19);移液管1ml(x7),2mL(x3),5mL(x5);量筒100mL(x1),恒温水浴(0℃);白瓷板;胶头滴管。

操作方法;

温度对酶活力的影响

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