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远慕生物:细胞培养中支原体污染的解决方案

2018-11-16 13:28 作者:洛辰 来源:上海远慕生物试剂

支原体最早发现于 1898 年,1956 年 Robinson LB 首次从细胞培养物中分离出支原体。它广泛存在于自然界中。污染细胞最常见的支原体包括发酵支原体(M.Fementans)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)、口腔支原体(M.orale)、精氨酸支原体(M.arginina)、梨支原体(M.pirum)、唾液支原体(M.salivarium)和人型支原体(M.hominis)。

支原体的特点:

1、支原体是最小、最简单、能够自我复制的原核生物,其大小介于细菌和病毒之间。

2、结构简单,无细胞壁,形态多样,可通过细菌滤器。

3、对一般抗生素不敏感,是细胞培养污染的一种常见微生物。

4、多数支原体污染比较隐蔽,显微镜下观察,可见单个荷包样菌落。

5、被支原体污染后的细胞培养物,引起细胞形态学和功能的改变,且很难清除。

 

 

 

支原体污染的特征:

    细胞形态学的改变

    细胞生长模式的改变

    细胞活力减弱

    转染效力显著降低

    培养基上可见黑色颗粒

    细胞表面可见黑色孔洞

支原体污染的检测:

1、电子显微镜技术

电镜中可看到支原体的多种增殖方式。

该技术快速、简便、省事省力,但敏感性不够高,能作为筛查方法,而对于可疑或阳性的细胞株,需要其他方法检测鉴定。

2、培养法

支原体在固体培养基上形成特征的「油煎蛋」菌落。

理想的培养法应采用多功能的培养基,以降低假阴性率,为增加对低滴度和低活力支原体检出率,应采用有氧和无氧两种培养条件及几种传代方式,或者与生物化学试验相结合检测支原体。

3、染色法

(1)姬姆萨或地衣红染色

姬姆萨染色后为淡紫色或蓝色,地衣红染色镜下观察可见支原体呈暗紫色小点,位于细胞外或细胞之间。

(2)DNA 荧光染色法

支原体污染的细胞不仅在细胞核而且在细胞核外及细胞膜上均可见散在荧光。

该方法操作较为简便,但轻度污染不易检出,且 DNA 荧光染色灵敏度不高、检测时需要荧光素及荧光显微镜,不能检测到种,一般要求培养无污染的指示细胞作为对照。

4、PCR 检测法

PCR 检测方法已经成为一种常用的有效检测微生物的方法,尤其适用于培养困难和抗原性复杂的细菌检测鉴定,可快速检测细胞培养物、生物制品、血清等生物材料中的支原体污染,比常规培养法和 DNA 间接荧光染色法快 5-10 天。

目前,北京宝威特生物提供性价比极高的专门针对支原体污染的全面解决方案,根据不同的用户需求,提供国产和进口两套支原体检测产品。

支原体解决方案包括:

1、针对高度保守的支原体 16SrRNA 序列设计,可检测的支原体种类非常广泛,不会受真核细胞或细菌 DNA 干扰。

2、基于普通 PCR 方法的产品:普通版可检测 49 种支原体,升级版更可广泛检测超过 209 种支原体,并配备了三重核查系统,确保结果准确。

3、新开发的基于实时荧光 PCR 方法的产品:可检测 70 种支原体,显著提高了检测的敏感性使其检测限达到 10 CFU/ml,并配备了内部质控和阳性质控以确保实时荧光 PCR 检测结果的有效性。

4、经本试剂盒测试的支原体菌株包括:肺炎支原体(M.pneumoniae)、精氨酸支原体(M.argnini)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)、发酵支原体(M.fermentans)、口腔支原体(M.orale)和无胆甾支原体(A.laidlawii),涵盖了所有常见的支原体污染种类。

5、检测所需的试剂都预先混合、并分装至反应管,只需加入模板 DNA 即可。

6、通过 8 联管检测体系有效避免交叉污染。

7、配套用于预防支原体污染的喷雾,以及用于消除支原体污染的抗生素溶液,全面清除支原体的污染。

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