菌落总数测定菌落计数需注意的事项

(1)如果稀释度大的平板上菌落数反比稀释度小的平板上菌落数高，则系检验工作中发生的差错，属实验室事故。此外，也可能因抑菌剂混入样品中所致，均不可用作检样计数报告的依据。 (2)如果平板上出现链状菌落，菌落之间没有明显的界限，这是在琼脂与检样混合时，一个细菌块被分散所造成。一条链作为一个菌落计，如有来源不同的几条链，每条链作为一个菌落计，不要把链上生长的各个菌落分开来数。此外，如皿内琼脂凝固后未及时进行培养而遭受昆虫侵入，在昆虫爬过的地方也会出现链状菌落，也不应分开来数。

(3)如果所有平板上都有菌落密布，不要用多不可计作报告，而应在稀释度最大的平板上，任意数其中2cm2个，除2求出每cm2内平均菌落数乘以皿底面积63.6cm2数，再乘其稀释倍数作报告。例如10-1～10-3稀释度的所有平板上均菌落密布，而在lO-3稀释的平板上任数2个cm2。内的菌落数是60个，皿底直径为9cm，则该检样每g(或m1)中“估计”菌落数为：60／2×63．6×1000=1908000或1.9×106。

63.6cm2数系按皿底直径为9cm时计算而得，即：(9／2)2×3．14=63．6；如所用平皿的皿底直径不是9cm，则可按其直径的实际cm数代人圆面积公式求出。

(4)菌落计数中，如能使用菌落计数器，则比较方便，灯光由侧面射向平板，菌落易于观察。由于仪器带有电子音响讯号，用特制金属探笔点数中，在发出音响之下始显示数字增加，不会发生差错。且灯光与平板之间夹有多用方格玻质规板(方格面积为lcm2)，也有助于对菌落密布的平板进行计数。

(5)检样如系微生物类制剂(如酸牛乳、酵母制酸性饮料)，则平板计数中应相应地将有关微生物(乳酸杆菌、酵母菌)排除，不可并入检样的菌落总数内作报告。一般在校正检样的pH7．6后，再进行稀释和培养，此类嗜酸性微生物往往即不易生长。并可用革兰氏法染色鉴别。染色鉴别时，要用不校正pH的检样做成相同稀释度的稀释液培养所生成的菌落涂片染色作对照，以资辨别。酵母菌卵圆形，远比细菌大，大小为2～5×5～30μm，革兰氏阳性着色。乳酸杆菌在24小时内，于普通营养琼脂平板上在有氧条件下培养，通常是不生长的。