实验中稀释血清样本的原因及方法

在ELISA实验过程中，样本稀释是一个重要的步骤，为何样本都需要稀释呢？今天就先向大家着重介绍一下血清样本稀释的原因以及稀释的方法。 一、稀释血清的原因：

1、比赛按捺对比明显，应稀释比赛物。

2、以下降非特异性反应，使特异性的抗原抗体反应充分体现出来。

血清稀释用一般的PBS即可，可加1％的BSA，能有用下降ELISA本底，血清的稀释倍数一定要事前确认，但也不必一点点，做一个预实验即可，挑选OD在1.0左右的稀释倍数，即ELISA中阴性孔OD在1.0，这么做出来的曲线对比会比较灵敏。

二、稀释血清的方法：

1、先把蛋白稀释一定的倍数，比如说10倍、20倍稀释（这样可以大体确认一个参数），将抗原进行一系列稀释包被反应等等。

2、再用一定稀释度的阳性参阅血清和阴性参阅血清进行孵育后洗刷，再加酶结合物进行反应，经孵育洗刷后，加底物溶液显色，停止反应后分别测定O.D值，挑选O.D值≥1.0的那个抗原稀释度为最适包被浓度。一般总是要挑选那个O.D值稍大于1.0，而不挑选小于1.0的抗原浓度。阴性参阅血清O.D值要求<0.1-0.2。就是要求阳性参阅血清和阴性参阅血清的O.D值有明显差别。

以上就是ELISA实验中稀释血清样本的原因及方法，大家在实验过程中一定要多多注意，否则可能会影响实验的最终结果。