实验过程
进行测试时,作为对照品的蔗糖标准品和相应的空白必须根据试剂盒制造商的要求在标准1cm石英比色皿中制备,此次实验使用的是上海远慕生物蔗糖试剂盒,如下表所示。
|
比色皿 |
蔗糖分析试剂[mL] |
样品量[mL] |
水[mL] |
|
蔗糖分析试剂空白 |
0.1 |
- |
0.1 |
|
葡萄糖分析试剂空白 |
- |
- |
0.2 |
|
对照品空白 |
- |
0.1 |
0.1 |
|
对照品测试 |
0.1 |
0.1 |
- |
|
样品空白 |
- |
0.1 |
0.1 |
|
样品测试 |
0.1 |
0.1 |
- |
将每个比色皿中物质混合均匀并在室温静置10分钟。然后将2.0 mL葡萄糖分析试剂加入到每个比色皿中,混合均匀并在室温再静置15分钟。
如果仪器配备了自动多联池,可以一次加载所有的空白、对照品和样品,使得测量流程变得更便利。
通过下面公式计算得到蔗糖浓度。首先计算总空白,它包括了样品和试剂的吸光度:
A(总空白)=A(样品/对照品空白)+A(蔗糖分析试剂空白)-A(葡萄糖分析试剂空白)
对于样品和对照品,因生成NADH产生的吸光度差值可如下计算:
ΔA=A样品/对照品测试-A总空白
现在就可以计算得到蔗糖浓度了:
(ε:蔗糖的吸光系数,d:光程)
总结:蔗糖含量可以很容易的使用酶试剂盒和紫外可见分光光度计进行测量。酶分析强大之处在于高专一性和灵敏性,可以分辨蔗糖和其它糖分子如葡萄糖和果糖。酶分析可以广泛用于饮料和其它食品。