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几种血涂片染色方法的比较

2021-10-14 10:28 作者:洛辰 来源:上海远慕生物试剂

  血涂片染色广泛应用于医学检验和组织学教学片的制作。传统的染色方法有Wright氏、Giemsa氏和WrightGiemsa混合法,作为医学检验以简单快捷为shou选,而要制作教学标本,则对染色效果、标本存放时间要求更高,对此,我们对各种染色方法进行了长期的探索和比较,以期找到较稳定的、效果满意的染色方法用于制作大批量教学标本。

  1  材料与方法

  1.1  采集标本  用消毒采血针头扎刺手指头或耳垂,滴取黄豆大小血滴于洁净载玻片上,推成均匀血膜,自然晾干,用甲醇固定2 min~5 min。大量制作教学标本可一次推出所需血膜,固定待用。

  1.2  染色

  1.2.1  Giemsa氏染色法  将Giemsa原液(配制1年后)分别与pH 6.4、6.6、6.7、6.8的磷酸盐缓冲液按1∶10的比例配成工作液;将固定好的血片分别滴染以上4种工作液,每种染液又分别染25 min、30 min、45 min、60 min,自来水冲洗、镜检。

  1.2.2  Wright氏染色法  染液按传统方法预先配好,我们使用配制1个月后的Wright氏染液,用前用pH 7的磷酸盐缓冲液稀释1倍,分别染5 min、10 min、15 min,然后用自来水冲洗干净、镜检。

  1.2.3  Wright-Giemsa混合法  取Giemsa原液1份、Wright氏原液5份、pH 6.7的磷酸盐缓冲液6份配成染液,滴染10 min、15 min、20 min,然后用自来水冲洗干净、镜检。

  2  结果

  2.1  Giemsa滴染  用pH 6.7的磷酸盐缓冲液配制的工作液染色45 min的血片,红细胞呈桔红色,白细胞核呈紫蓝色,中性颗粒浅红色,嗜酸性颗粒桔红色,淋巴细胞胞质浅蓝色,单核细胞胞质灰蓝色,血小板紫蓝色。而pH<6.7和染色时间较短者,则核染色偏红或难着色,pH>6.7则核呈蓝色,嗜酸性颗粒颜色偏暗。

  2.2  Wright氏染液滴染  染色15 min,细胞核和血小板紫红色,其他结果与Giemsa滴染相似,染色时间过短则核难着色,时间过长,则易使染液挥发而造成污染。

  2.3  Wright-Giemsa混合染色  细胞核呈紫蓝色,红细胞紫红色,其他结果与Wright氏滴染相似。

  3  比较与讨论

  三种染色法均为传统染色法,各有优缺点:Giemsa氏染色法,染色过程易控制、不污染是其最大的优点,染色效果对染液pH值要求高,经过反复多次试验,以pH 6.7染色效果zuihao,各种细胞的特性显示清楚,但染色时间长是其缺点,故此法较适于制作教学标本用;Wright氏染色法的优点是染色时间短,结果出现快,较适于临床检验,但其染色过程不易掌握、易污染是其缺点;WrightGiemsa混合法虽能对两种染法起互补作用,但染液变性快、易污染,也不适于教学标本染色。

  4  体会

  各种涂片染色后,不要倾去染液,否则易使染液沉淀在片上;直接用自来水冲洗比用蒸馏水或缓冲液冲洗更方便、彻底,可通过调大水压及时冲去结合尚未牢固的染料沉渣。

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