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做转染实验,别忽视质粒中内毒素!

2021-10-09 11:17 作者:洛辰 来源:上海远慕生物试剂
什么是内毒素?

细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖(LipopolySaccharide,LPS)和蛋白的复合物,当细菌裂解时便会大量释放出来。内毒素单位为EU。

内毒素对试验的影响

内毒素存在极大程度地影响转染效率。同时内毒素还可能激活免疫细胞的非特异反应,造成实验中的假阳性。因此,为了保证高转染率和转染细胞高存活率,必须从质粒制备的过程中将内毒素去除。

内毒素和质粒的关系

由于内毒素两亲性和负电荷性,性质类似于DNA,因此在质粒纯化中会伴随质粒一同被纯化出来。质粒中内毒素含量的高低常用EU/?g质粒表示。

按照EU/?g大小,质粒被分为三个级别:测序级别(>50EU/?g)、转染级别(<50EU/?g)和无内毒素级别(<0.1EU/?g)。

再次强调

当你提取的质粒DNA是为了转染原代细胞、悬浮细胞或者敏感细胞;进行基因沉默研究、细胞注射显微操作;进行基因治疗或者DNA疫苗等要求极为严格的实验,就应该考虑Endotoxin-Free的质粒。
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