ELISA加样如何避免气泡？为何避免气泡？

通常气泡都是聚集在酶标板的孔周围，导致孔中液体不能与孔壁有效接触，使孔内反应不均一。很多说明书、教科书上也都提到，加样时要避免出现气泡，这到底是什么原因呢？因为在做实验的过程中，有时为了打干净枪头里面的液体，很容易产生气泡，是不是这样对实验结果会后什么影响？

1、包被时有气泡的话，将导致包被不完全实际包被量下降--弱阳性甚至假阴性。

2、封闭时有气泡的话，将导致大量未结合位点的存在，引起非特异性结合--本底增高，假阳性。

3、加样时有气泡的话，抗原抗体不能有效的结合--弱阳性甚至假阴性。

4、加二抗时有气泡的话，抗原抗体不能有效的结合--弱阳性甚至假阴性（竞争法相反----假阳性）。

5、加显色液时有气泡的话--－显色不完全。

6、加终止液时有气泡的话（1、不能完全终止反应 2、影响酶标仪比色，OD值增高）

7、洗涤时有气泡的话，非特异性结合物不能完全洗去，做无用功。

避免方法：

1、加样时尽量靠近孔底（不要接触孔底），用力均匀，不要过快过猛。

2、封闭时一定要加满孔。

3、洗涤时一定要加满孔(重要），气泡会浮上来最终驱除。手工洗板时一定要吸干水分并用力拍干。