碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)实验步骤

产品名称：碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)
产品分类：酶类染色
产品用途：用于石蜡切片、冰冻切片、骨髓细胞涂片、血液涂片等的碱性磷酸酶染色,又称同时偶联法
注意事项：碱性磷酸酶活性部位呈蓝色,位于胞桨中。非特异性反应少,结果可靠。
储存条件：-20℃，避光，有效期6个月
规格：4*2ml 4*10ml 4*20ml

简介：碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，简称ALP或AKP）为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适PH9.2-9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处（细胞膜），如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮至溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜。
碱性磷酸酶染色液（偶氮偶联法）不是采用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性，而是采用偶氮偶联法（又称同时偶联法），其原理是在PH9.2-9.8的碱性条件下，细胞内碱性磷酸酶可使AB-BI磷酸盐水解，释放出磷酸和萘酚，后者与偶联重氮盐生成有色产物，定位于细胞质中。该染液专门用于血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、梯度入水后的石蜡切片等的碱性磷酸酶染色，碱性磷酸酶活性部位呈红色，位于胞浆，结果较金属盐沉淀法可靠。

自备材料：
1、载玻片、湿盒
2、普通光学显微镜

操作步骤（仅供参考）：
1、血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、石蜡切片入ALP固定液固定3min（梯度入水后的石蜡切片无固定），水洗。
2、滴加配置好的ALP孵育液，放入湿盒中，避光孵育15-20min，水洗。
3、苏木素染色液复染5-8min或甲基绿染色液复染3-5min。
4、水洗、镜检或甘油明胶封固后镜检。

临床意义：
1、类白血病反应积分明显增高，未经治疗的慢性粒细胞白血病积分明显减低。
2、急性细菌性感染积分明显增高，病毒性感染积分多正常或减低。
3、再生障碍性贫血积分常增高，PNH、MDS积分常减低。

注意事项：
1、血液或骨髓细胞涂片或其他样本均应新鲜，厚薄适宜，及时固定，否则会影响酶的活性。
2、ALP孵育液易失效或降低阳性强度，即配即用，不宜久置。
3、复染时，苏木素染色液或甲基绿染色液二者取其一。
4、每次染色时，应有阳性对照片。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月