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蛋白Marker使用常见问题分析!

2021-09-15 10:54 作者:洛辰 来源:上海远慕生物试剂
做蛋白表达实验时,通常用SDS-PAGE电泳检测目的蛋白的表达情况,MARK是其中非常重要的参照物,使用Mark会遇到以下几种情况:

条带模糊:
电压过高或电泳时间过长,产热过多导致电泳缓冲液温度升高。建议参照Trans产品使用说明书。
电泳缓冲液陈旧,建议使用新鲜的电泳缓冲液,为了获得理想的结果建议在使用前将缓冲液预冷。
分离胶的浓度偏低,建议使用合适的胶浓度。
SDS-PAGE凝胶放置时间过长,建议使用新配制的凝胶电泳。

带型不整齐:
建议点样时将蛋白marker 放在泳道中间。如在凝胶两侧泳道,由于边缘效应,离子强度不匀等,均会导致带型变宽或弯曲。
凝胶配制不匀,凝胶内存有气泡,或点样孔中有细碎的残胶。

样品滞留点样孔:
浓缩胶配制有问题或胶孔堵塞。

Marker蛋白表达检测
免疫荧光技术(Immunofluorescence technique )又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合,利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。

技术原理
免疫荧光技术是根据抗原-抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。利用荧光显微镜可以看见荧光所在抗体的性质和定位。
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