细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)操作步骤

产品名称：细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)
储存条件：-20℃，避光，有效期12个月
用途：检测细胞自噬


简介：自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，最终将吞食物在溶酶体内降解的过程，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。单丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC+)是一种荧光色素，是嗜酸性染色剂，通常被用于检测自噬体形成的特异性标记染色剂，其检测激发滤光片波长355nm。阻断滤光片波长512nm。细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)，适用于培养细胞的自噬染色，又称为MDC染色液，可与EB合用双染。


操作步骤(仅供参考)：
(一)、MDC单独染色：
1、用去离子水稀释1×Wash+buffer至1×。
2、离心，收集细胞，用1×Wash+buffer清洗细胞1次，弃上清。
3、加入适量的1×Wash+buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度至106/ml。
4、取适量细胞悬液至新的EP管中，加入MDC+Stain，轻轻混匀。
5、室温避光染色。
6、离心收集细胞，用1×Wash+buffer清洗细胞2次，弃上清。
7、加入Collection+buffer重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。
8、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，计数并拍照。


(二)、与EB双染色：
1、用去离子水稀释1×Wash+buffer至1×。
2、离心收集细胞，用1×Wash+buffer清洗细胞1次，弃上清。
3、加入适量的1×Wash+buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度至106/ml。
4、取适量细胞悬液至新的EP管中，分别加入MDC+Stain和EB染色液，轻轻混匀。
5、滴加于在玻片上，室温避光染色，加盖玻片。
6、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长512nm)，计数并拍照。

染色结果：
正常细胞   细胞被均匀染成黄绿色细胞
凋亡细胞   染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒


注意事项：
1、MDC Stain和EB，试剂有一定毒性，请小心操作。
2、吖啶橙染色常与EB染色合用，可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
3、操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。