欢迎来到上海远慕生物科技有限公司官方网站!
15121072253
021-58999013

细胞冻存经验之谈!

2021-01-12 9:05 作者:洛辰 来源:上海远慕生物试剂
细胞冻存是将细胞储存在低温环境中,减少细胞代谢,实现长期储存的一种技术。在大多数细胞系中,细胞会随着衰老和演化不断的积累改变,造成表型和基因型的“培养漂移”,在冻存过程中,适当的操作和合适的冻存条件可以减少细胞特性的改变或丢失,起到细胞保种的作用。因而,正确且成功的冻存对于细胞的长久应用起着非常重要的作用。

01、正确的培养和温和的细胞收集

在冻存前,细胞应保持最佳的生长状态(处于对数期或指数期),理想情况下,培养基应在收获前24h更换。建议对培养物进行微生物污染物检测,特别是支原体,确保细胞没有任何的污染。在细胞的收集过程中,实验操作要尽可能的温和,避免细胞受损。

02、适当的低温保护剂

目前,细胞冻存最常用的技术是液氮冷冻保存法,主要采用加适量保护剂的缓慢冷冻法冻存细胞,减少在冷冻过程中对细胞的损害。细胞在不加任何保护剂的情况下直接冻存,细胞内外的水分会很快形成冰晶,从而引起一系列不良反应。

聚乙烯基吡咯烷酮、乙二醇、甲醇和甲基乙酰胺等都是低温保护剂。在细胞冻存中最常见的是二甲基亚砜(DMSO)和甘油,这两种物质分子量小,溶解度大,易穿透细胞,可以使冰点下降,提高细胞膜对水的通透性,关键在于对细胞无明显毒性。DMSO通常浓度为5 - 10% (v/v),最佳浓度随细胞系的不同而不同。甘油在冷冻介质中的最终浓度为5 - 15%,同样,最佳浓度取决于细胞系。为了提高较难保存的细胞的存活率,冻存时可以选择增加保存液中的血清浓度。想要冻存细胞更快更稳,细胞冻存液会是不错的选择,无需配制,直接在细胞中加入适量的冻存液即可,操作简单,就能拥有高活率的细胞。

03、缓慢的冻存速度

慢速冻存对细胞活力的恢复是非常重要的。对大多数动物细胞,每分钟降低-1到-3℃能让细胞更好适应冻存状态。目前大多数实验室常用的方法是梯度降温法:在4℃放置30 min,再转入-20℃存放 2h,接着转入-80℃冰箱冷冻过夜,次日将冻存管转移到液氮罐中长期保存。一款可重复使用的细胞冻存盒,可省去多次反复转移细胞的时间,将准备好的细胞冻存管放进冻存盒,直接在-80℃过夜后就可以转移至液氮罐中。无论使用哪种冻存方法,重要的是在转移存放位置的过程中一定要迅速,转移时建议将冻存管放在干冰中恒温,尽量避免转移过程因温度变化对细胞活力的影响。

04、持续的低温储存

细胞温度应始终保持在-130℃以下,才能达到最佳存活率。如果存放温度控制不好,存活率会随着时间的推移而降低。建议将细胞在液氮条件下长期保存,需要定期人工检查液氮罐的密闭性和液氮量是否充足,避免因储存条件造成细胞的损毁。
收缩
QQ咨询
  • 标准品
电话咨询
  • 021-58993001
  • 15121072253
邮箱咨询
  • shyuanmusw@163.com