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新生牛血清蛋白检测指标有哪些?

2020-09-30 10:19 来源:上海远慕生物试剂
新生牛血清(Newborn Calf Serum)是来自刚出生~出生后2周内的新生牛静脉取血。经大规模混合后除菌过滤制成成品,主要用于动物细胞培养,是医药生物技术产品的重要原材料之一,其质量好坏直接影响细胞生长情况。

总蛋白含量是新生牛血清需要检查的指标。它属于化学成分的初步分析。有人统计过国产新生牛血清的蛋白含量1,在比较各产区各年份后,发现其含量在3.7%~4.4%之间。进口新生牛血清并不与之完全一致。因为国内的血清常采自奶牛,而国外的血清常采自肉牛。蛋白质是新生牛血清的主要成分,在细胞培养中起着维持渗透压、pH 值缓冲、物质运输和提供营养、促进细胞粘附等重要作用。在胎牛血清中,其总蛋白含量要更低。

血红蛋白含量也是新生牛血清一项重要检测指标。它是在血清运输和加工过程中细胞裂解释放到血清中的。之所以检测主要是由于牛血清中血红蛋白具有氧化性,其含量过高会引起羧基的产生和脂质过氧化反应,从而导致生产细胞受损,也会增加下游纯化处理的难度,给药品质量带来安全隐患2。有报道血红蛋白具有神经毒性。在脑皮层细胞的体外培养中,培养24小时后,血红蛋白会造成神经元的广泛死亡(EC50为1-2.5μM)3。在《中国药典》三部(2015 版)中,要求对新生牛血清中血红蛋白含量应不高于200 mg/L,方法主要为分光光度法。

使用时常见问题及解决方法:
一、保存血清zui好的方法?
血清应保存在-5℃至-2O℃若存放于4℃时,请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶,建议将无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。
二、如何解冻血清才不会使产品质量受损?
将血清从冷冻箱取出后,先置于2-8℃冰箱使之溶解,然后在室温下使之全溶。但必须注意的是,溶解过程中必须规则地摇晃均匀。
三、如何避免沉淀物的产生?
1.解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-2O℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),实验显示非常容易产生沉淀物。
2.解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生
3.请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。
4.血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。
5.若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。
四、血清解冻后发现有絮状沉淀物出现,该如何处理?
欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。但不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞过滤膜。
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