小伙伴们遇到过这种情况吗?
当您的课题进行到白热化程度时
却发现细胞被污染了
此时大家的心情可谓五味杂陈
形容一下就是
问君能有几多愁,眼泪恰似一江春水向东流
不过,别担心
远慕生物炼就火眼金睛
帮助大家识破各种污染,拯救您的细胞
我们先来看看污染的真面目,总结下来无非以下几种类型:
我们一起来分析它们的特征:
1
真菌-深藏不露
真菌之所以深藏不露,是因为它们一般不会导致培养基变浑浊,所以在污染早期,很难发现它们的踪迹。直到长到一定规模后在镜下可观察到分叉细丝状的菌丝(有些呈管状,树枝状,串珠状的菌丝)(如图1,图2)。这类污染中,为首的污染代表是酵母菌:显微镜下常见成串的珠状物,形态呈卵形,大约比细胞小5~10倍,当其进行出芽生殖时,会聚集成连体结构;爆发污染严重时,会造成培养基pH值改变,不易除去。
图1. 真菌污染 图2. 真菌污染
2
细菌-屡见不鲜
细菌种类繁多,分布广泛,是最容易污染细胞的微生物。
图3. 细菌污染
3
支原体-无孔不入
如下图所示:
图4. 支原体污染
4
黑胶虫-神秘莫测
5
病毒-专一任性
图5. 感染之前 图6. 感染24小时后
6
细胞交叉污染-玉石难分
细胞交叉污染之所以“玉石难分”是因为其长相和实验所养的目的细胞形态相似,难以分辨。对于细胞株的交叉污染,曾有文献报道统计,目前使用的细胞株大约有15~20%不是科学家们所认为的细胞,而在生物医药领域中,细胞来源和细胞株身份鉴定检测的观念是普遍缺乏的。
细胞株的交叉污染,常因不经意的实验疏忽(不同细胞株分盘时,共享一瓶培养基;枪头、移液管忘记更换,而造成不同细胞株之间的混合污染;实验操作人员录入错误细胞株名称;传代时的培养皿;冷冻细胞时的冻存管)而发生,继而造成后续数据搜集错误。
目前大部分的科学期刊都已有“细胞相关实验论文发表前,均需附上细胞鉴定报告”的规定(可查阅:文章发表前要求提供细胞鉴定的杂志),以此保证数据来源的正确性。
那么如何鉴别呢?细胞身份验证方式:短串联重复序列(STR)、同功酶分析、染色体组分型、扩增片段长度多态性(AFLP)的特征分析等方法。其中STR,是目前国际细胞库(包括:ATCC、DSMZ或是JCRB)常用于细胞株身份鉴定方法。
☆ 温馨提示,至少每半年一次进行细胞鉴定,理想情况每2-3个月鉴定一次,且课题开展前最好先确认使用的细胞身份。