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关于预染蛋白marker你知道多少?

2019-10-08 11:33 作者:洛辰 来源:上海远慕生物试剂
什么是预染蛋白marker,关于预染蛋白marker你知道多少?
         蛋白marker可分为未预染的Marker即宽分子量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准以及预染的Marker即单色预染和多色预染。那么,什么是预染蛋白marker?预染蛋白marker为一些纯化好的蛋白的混合物.这些蛋白混合物与一种蓝色染料共价偶联.可在凝胶电泳时出现强度均匀的8条带.同未预染的蛋白marker相比,预染蛋白marker因与染料共价偶联而在SDS-PAGE电泳时的迁移特性发生某些改变.
        预染蛋白分子量标准
        预染蛋白分子量是一些纯化好的蛋白混合物,通过与染料共价耦联,在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。预染蛋白分子量的出现方便了我们的实验,这种蛋白分子量标准可以帮助我们在电泳时、电泳后,以及转膜后监测电泳情况和估计迁移率——比如,已知垂直电泳最佳分辨区域大约在胶的2/3处,如果使用预染蛋白Marker就可以预测目标蛋白进入最佳分辨区时停止电泳以得到最佳分辨效果;如果观察到Marker电泳异常也可以及时终止电泳;另外在Western Blot转膜以后可以直接观察蛋白转膜是否完全,还可以在膜上标记蛋白分子量,所以吸引了许多实验室人员购买预染蛋白标准。值得注意的是预染蛋白Marker与染料共价耦联,所以在不同的缓冲条件下电泳时迁移特性可能会发生某些变化,可能导致一些偏差,所以不太适合精确定位蛋白——不过多数情况下Marker的条带未必能和我们的目标蛋白完全一样,我们得到的也不过是一种相对Marker指示的参考大小,最后都需要Western来定性,所以如果不是要区分大小相近的条带,预染Marker还是很好用的,而且也可以和未染色的蛋白标准一起使用。
        预染蛋白标准可以分为两种:单色预染和多色预染,其实区别就在于帮助在实验过程中辨认某个条带的大小——Marker条带越多参考价值越大,可就越难辨认区分,如果用不同的颜色来区别就比较好辨认啦。如果沉闷的电泳实验中跑出五颜六色的彩虹Marker,此时心情想必会愉快一些!单色的Marker通常是利用其中某些条带加倍浓度来提示其大小的。还有一点特别要注意,由于转膜是一个将胶里的Marker浓缩在洁白的膜上,所以需要的上样量相对少一些,如果想要在电泳过程中看到美丽的“彩虹”,或者单色的Marker往往需要比说明书里多加一些Marker的。
        非预染蛋白marker和预染蛋白marker有什么区别
        简单讲,就是非预染蛋白marker电泳时看不到条带,染色后才能看到,而预染蛋白marker会有特定的某些蛋白条带带有颜色,电泳过程中可以观察到,还有在WB过程中也起到转膜是否成功的指示作用
        预染的marker的分子量在不同浓度胶上跑出来是不一样的,这个叫表观分子量。未预染的marker是最准确的,如果只做wb,预染的marker就够了,每次都能观察转膜情况。
        其他都是些细节上的区别,比如有些预染蛋白marker会做成彩虹色的,以便区别分子量大小有些预染蛋白marker的条带比较多等等
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