远慕告诉您:如何让细胞乖乖沉睡或满血复活

养细胞时期的小编，
常常希望自带一股开gua神力，
保护好娇弱的细胞，拯救惨不忍睹的实验！
如同《星球大战》里拥有 ”原力光环“的主角们，
可以隔空移物，手接闪电，最hou拯救世界！
小编至今疑惑“原力”到底是什么?
“ I am one with the force ，
and the force is with me.”
翻译过来比较玄，很像中国武侠小说的内力~
“ 我与原力同在，原力与细胞同在
冻存的细胞，满血复活吧！ ”

回 到 现 实
经常有用户反映“细胞冻存与复苏遇到了问题”
“如何握住原力，让你的细胞乖乖沉睡又满血复活？”

远慕生物的老司机为此做了以下总结：

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选 好 细 胞 冻 存 液 是 基 础

使用动物血清常常会遇到很多问题，例如：病毒感染、其他动物源的污染。使用无血清制品培养与冻存细胞，可以消除这方面的隐患。此外，无血清冻存液可以确保细胞在化学成分固定的条件下生长，更进一步确保细胞冻存时的条件稳定。

慢 慢 做 冷 冻

若您养的是贴壁细胞，请先将细胞消化下来；若是悬浮细胞，请直接按以下步骤进行：
1. 以200-300g离心3分钟，弃去上清，收集细胞。
2. 用无血清冻存液将细胞重悬（不需回温），将细胞密度调整为3~5x10⁶ cells/ml，添加到冻存管中（一般每管1ml）。
3. 建议将含有细胞悬液的冻存管放进渐进降温盒或是保温杯中，置于-80°C冰箱6小时以上或是过夜（或不需要程序降温)。
4. 将冻存管迅速移到液态氮中保存。
5. 冻存24小时后，建议检测细胞存活率。

细 胞 复 苏 要 迅 速

1. 将细胞冻存管由液态氮中取出，置于室温回温，不用水浴溶解。此时可准备新鲜培养 基、无菌15ml离心管、培养瓶。
2. 在生物安全柜内，直接以少量培养基反复冲融，使细胞团块化冻。
3. 先在无菌15ml离心管中加入5ml培养基，再将化冻的细胞悬液加入离心管中。以200~300g，3分钟离心收集细胞。
4. 倒去上清液，重悬细胞，移到培养瓶中培养。