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如何为您的实验选择最适合的缓冲液那!

2019-01-07 10:11 作者:洛辰 来源:上海远慕生物试剂
在各种细胞、蛋白、DNA实验中,所有的组分都是傲娇的宝宝,需要细心的呵护,否则一旦离开天然的生物环境,它就会变得捉摸不定,严重影响实验成果。
 
要为他们提供好的天然环境,一定少不了缓冲液的身影,那么在众多的缓冲液之中该如何选择呢?
我们来捋一捋常用的生物缓冲液都有哪些,又各自有什么特点:
 
磷酸盐缓冲液
磷酸盐缓冲液是使用最为广泛的一种缓冲剂,由于它有二级解离,所以缓冲的pH值范围很广,可配置各种pH值的酸性、碱性和中性缓冲液:
配制酸性缓冲液可直接用NaH2PO4或KH2PO4,pH范围在1~5;
碱性缓冲液可直接用Na2HPO4或K2HPO4,pH范围在9~12;
中性缓冲液则用等浓度的NaH2PO4和Na2HPO4或者等浓度的KH2PO4和K2HPO4溶液混合,pH在5.5~8.5。
磷酸盐缓冲液优点
易配成各种浓度
适用pH范围宽
pH受温度影响小
稀释后pH变化小
磷酸盐缓冲液缺点
易与常见的钙离子、镁离子及重金属离子缔合成沉淀
会抑制某些生物化学过程
 
Tris缓冲液
Tris缓冲液是在生物化学研究中使用较广泛的一种缓冲剂,其本身为弱碱,常用有效pH在“中性”范围,Tris-HCl缓冲液:pH=7.5~8.5;Tris-磷酸盐缓冲液:pH=5.0~9.0。
Tris-HCl缓冲液优点
碱性较强,可以只用这一种缓冲液配置由酸到碱的但范围pH缓冲液;
对生物化学过程干扰很小,不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。
Tris-HCl缓冲液缺点
pH受浓度影响较大,稀释10倍,pH变化大于0.1
温度效应大,如4℃时pH=8.4,37℃时pH=7.4
易吸收空气中的二氧化碳
对某些pH电极有一定干扰作用,要使用与Tris溶液具有兼容性的电极
除了Tris-HCl之外,tris还有多种衍生缓冲液:
TBS=Tris-HCl+ NaCl+KCl,常用于清洗免疫染色的组织或Western Blotting中的蛋白印迹膜等;
TBST=Tris-HCl+NaCl+tween20,做Western Blotting中常用的一种洗膜缓冲液;
TE=Tris-HCl+EDTA,对DNA的碱基有保护性,常被用于DNA的稳定和储存;
TAE=Tris base+乙酸+EDTA,是大片段DNA短时间电泳时广泛使用的缓冲系统;
TBE=Trisbase+硼酸+EDTA,适用于长时间DNA电泳,对较小片段分离效果较好。
 
甘氨酸缓冲液
甘氨酸缓冲液pH范围较宽,使用范围较广,可用pH2.0~11.0,最常用体系和pH范围如下图所示:
 
氨基酸缓冲液优点:
为细胞组份和各种提取液提供更接近的天然环境。
氨基酸缓冲液缺点:
与磷酸盐缓冲体系相似,也会干扰某些生物化学反应过程,如代谢过程等;并且试剂价格较高。
HEPES缓冲溶液
HEPES是一种非离子两性缓冲液,其在pH7.2~7.4范围内具有较好的缓冲能力,常用在生化诊断试剂盒、DNA/RNA提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里。
HEPES缓冲液优点:
在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的pH值,并对细胞无毒性作用。
HEPES缓冲液缺点:
在高浓度时对一些细胞可能有毒,与其他缓冲剂相比价格略贵。
说了半天,你可能觉得我还是不知道怎么选,大家可以去苏州亚科的官网www.yacoo.com.cn了解下,或者请看下图:
选择缓冲液的一般原则
重中之重,先确定你的体系所需要的pH值;
选择缓冲体系,其解离常数pKa值应该在设定的pH上下一个pH值单位内,因为缓冲液的pKa变化超过一个pH单位时,其缓冲能力就会明显下降;
缓冲体系不应影响蛋白质的活性或者DNA的稳定性,并避免其他离子的干扰;
最后,还要考虑温度的影响:温度不仅对缓冲液有影响,对细胞也有影响,大多数动物细胞在37℃的生理状况下pH为7.0~7.5,而在温度下降到0℃时可达到8.0。
最后,综合考虑各项因素,为你实验的宝宝们选择一个合适的缓冲体系吧!
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