人可溶性血小板内皮细胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)ELISA试剂盒说明书

    实验原理
    试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中sPECAM-1/sCD31表达。用纯化的sPECAM-1/sCD31抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中sPECAM-1/sCD31相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的sPECAM-1/sCD31抗体结合，形成抗体抗原酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中sPECAM-1/sCD31的存在与否。

    样本要求：
    1．sPECAM-1/sCD31人可溶性血小板内皮细胞粘附分子1酶联免疫试剂盒标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于20℃保存，但应避免反复冻融
    2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

    操作步骤：
    1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
    2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50%l。然后在待测样品孔先加样品稀释液40%l，然后再加待测样品10%l。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
    3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
    4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
    5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
    6.加酶：每孔加入酶标试剂50%l，空白孔除外。
    7.温育：操作同3。
    8.洗涤：操作同5。
    9.显色：每孔先加入显色剂A50%l，再加入显色剂B50%l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
    10.终止：每孔加终止液50%l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
    11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

    试剂盒注意事项：
    1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
    2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡1530分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
    3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
    4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
    5．底物请避光保存。
    6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm
    7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。

    保存条件及有效期：
    1．试剂盒保存：2-8℃。
    2．有效期：6个月