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人丙二醛(MDA)ELISA试剂盒使用说明书

2024-04-25 11:44 来源:上海远慕生物试剂
人丙二醛(MDA)ELISA试剂盒(用于血清、血浆、细胞培养上清液和、唾液生物体液内)
 
原理
本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗人 MDA 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 MDA与单抗结合,加入生物素化的抗人MDA,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,加入底物工作液显蓝色,最后加终止液硫酸,在450nm处测OD值,MDA浓度与OD值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中MDA浓度。

试剂盒组成(2-8℃保存)
酶标板(Coated Wells)    96孔    酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate)    12ml
10×标本稀释液(Sample Buffer)    12ml    20×浓缩洗涤液(Wash Buffer)    50ml
标准品(Standards):4000nmol/瓶    2瓶    底物工作液(TMB Solution)    12ml
第一抗体工作液(Biotinylated Antibody)    12ml    终止液(Stop Solution)    12ml

准备试剂与收集血样
1. 收集标本:血清、血浆(肝素抗凝)、细胞培养上清液、尿液、唾液等尽早检测,2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20 ℃或-70 ℃)保存,避免反复冻融。血清、血浆、细胞培养上清至少作1:50稀释(取20ul,加标本稀释液980ul,稀释50倍)。
2. 标准品液配制:使用前加入2ml蒸馏水混匀,配成2000nmol/ml的溶液。设标准管8管,第一管加标本稀释液900ul,第二至第八管加入标本稀释液500ul。在第一管中加入2000nmol/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul,移至第二管。如此反复作对倍稀释,从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。
3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。
4. 洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)

检测程序
1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。
3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul,置37 ℃暗处反应15分钟。
8. 每孔加入100ul终止液混匀。
9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

结果计算与判断
1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。
2. 以标准品200、100、50、25、12.5、6.25、3.12、0 nmol/ml为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上作图,画出标准曲线。
3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应MDA含量,再乘上稀释倍数即可。

试剂盒性能
1.   灵敏度:最小的MDA 检测浓度小于1.5nmol/ml。
2. 特异性:可同时检测重组或天然的人MDA。不与人其它细胞因子有交叉反应。
3. 重复性:板内、板见变异系数均小于10%。

注意事项
1.   以上标准孔及待测样品均建议做复孔,每次测定应同时做标准曲线。
2.   洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。
3.   板条开封后剩余板条要再封好,保持板条干燥。
4.   本试剂盒宜置4oC冰箱保存。
5.   本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断!


 
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