人胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)ELISA试剂盒使用说明书

中文名称：人胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)ELISA试剂盒
英文名称：Human Thymic Stromal Lymphopoietin Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit

原理
本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗人TSLP 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 TSLP与单抗结合，加入生物素化的抗人TSLP，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，TSLP浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中TSLP浓度。

试剂盒组成（2-8℃保存）
酶标板（Coated Wells）    96孔    酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate）    12ml
10×标本稀释液（Sample Buffer）    12ml    20×浓缩洗涤液（Wash Buffer）    50ml
标准品（Standards）：2.4ng/瓶    2瓶    底物工作液（TMB Solution）    12ml
第一抗体工作液（Biotinylated Antibody）    12ml    终止液（Stop Solution）    12ml

准备试剂与收集血样
1. 收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反复冻融。
2. 标准品液配制：使用前加入0.3ml蒸馏水混匀，配成8000pg/ml的溶液。设标准管8管，每管加入标本稀释液300ul。在第一管中加入8000pg/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出300ul弃去。第八管为空白对照。
3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。
4. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）

检测程序
1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。
3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。
6. 洗板：同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗处反应15分钟。
8. 每孔加入100ul终止液混匀。
9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

结果计算与判断
1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。
2. 以标准品4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0 pg/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。
3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应TSLP含量即可。

试剂盒性能
1. 灵敏度：最小的TSLP 检测浓度小于40pg/ml。
2. 特异性：可同时检测重组或天然的人TSLP